Kỹ Thuật Tách Chiết DNA Trong Phòng Thí Nghiệm: Mọi Thứ Bạn Cần Biết

CEO Hưng Tabi
Ảnh: Tách chiết DNA 1. Tách Chiết DNA Là Gì? Tách chiết DNA là một kỹ thuật cơ bản được sử dụng trong phòng thí nghiệm di truyền học, phân tử học, và sinh vật...

kỹ thuật tách chiết dna Ảnh: Tách chiết DNA

1. Tách Chiết DNA Là Gì?

Tách chiết DNA là một kỹ thuật cơ bản được sử dụng trong phòng thí nghiệm di truyền học, phân tử học, và sinh vật học. Việc tách chiết DNA đòi hỏi chất lượng và số lượng DNA sau quá trình tách phải đáp ứng các yêu cầu phân tích sau này.

2. Nguyên Lý Tách Chiết DNA

Mỗi loại mô và tế bào yêu cầu quy trình tách chiết DNA khác nhau. Tuy nhiên, nguyên lý tách chiết DNA từ tế bào bao gồm các bước cơ bản sau:

  • Bước 1: Phá màng tế bào.
  • Bước 2: Loại bỏ protein.
  • Bước 3: Tủa nucleic acid.

3. Phương Pháp Tách Chiết DNA

Kỹ thuật tách chiết DNA sử dụng hai phương pháp chính: truyền thống và từ xương người. Mỗi phương pháp có đặc điểm và cách thực hiện riêng. Dưới đây là một số phương pháp tách chiết DNA chi tiết mà bạn có thể tham khảo.

3.1 Chuẩn Bị

Trước khi thực hiện các thao tác tách chiết DNA, bạn cần chuẩn bị đầy đủ phương tiện, hóa chất, và mẫu. Việc chuẩn bị cẩn thận sẽ giúp quá trình tách chiết diễn ra thuận lợi và chính xác. Người thực hiện phải là kỹ thuật viên xét nghiệm Sinh học phân tử đã được đào tạo chuyên nghiệp.

Phương tiện

  • Buồng vô trùng (biology cabinet).
  • Máy ly tâm tốc độ cao (tốc độ tối đa: 14.000 vòng/phút).
  • Máy vortex.
  • Các dòng pipet: 10 µl, 20 µl, 100 µl, 200 µl, 1000 µl.
  • Đầu côn có màng lọc.
  • Ống eppendorf 1,5ml vô trùng, không có enzym nucleaza.
  • Ống PCR vô trùng 0,2 ml, không có enzym nucleaza.
  • Tủ lạnh 4 - 8 độ C, tủ âm sâu - 20 độ C.
  • Găng tay.

Hóa chất Sử dụng bộ kit tách DNA thương mại. Trong trường hợp tách thủ công, kỹ thuật viên sử dụng các sinh phẩm cần thiết như proteinase K, phenol/chloroform, đệm ly giải tế bào, cồn tuyệt đối để tách chiết DNA.

Bệnh phẩm

  • 2ml máu ngoại vi/máu cuống rốn chống đông bằng EDTA.

3.2 Phương Pháp Tách Chiết DNA Truyền Thống

kỹ thuật tách chiết dna Ảnh: Phương pháp tách chiết DNA truyền thống

Để quá trình tách chiết DNA diễn ra chính xác, kỹ thuật viên cần nắm rõ các thao tác. Phương pháp tách chiết DNA truyền thống gồm 3 bước sau:

  • Bước 1: Phá màng tế bào và màng nhân bằng cách nghiền mô và tế bào trong dung dịch chất tẩy (SDS) và proteinase để giải phóng DNA ra môi trường và phân hủy protein liên kết với DNA.

  • Bước 2: Trộn lẫn DNA với các thành phần khác của tế bào, chủ yếu là protein trong dung dịch. Sau đó, tách DNA ra khỏi protein bằng hỗn hợp Phenol/Chloroform.

  • Bước 3: Sử dụng Ethanol/Isopropanol để tủa DNA trong dung dịch đã thu được trước đó. Sau đó, ly tâm để thu cặn DNA. Chất cặn này có thể được rửa trong Ethanol 70% một hoặc hai lần để làm sạch mẫu. Cuối cùng, bay hơi cồn và huyền dịch hóa cặn DNA trong đệm.

3.3 Phương Pháp Tách Chiết DNA Từ Xương Người

Phương pháp tách chiết DNA từ xương người đòi hỏi quy trình cẩn thận do bề mặt xương cứng và khó tan vỡ. Dưới đây là một số phương pháp tách chiết DNA từ xương người mà bạn có thể tham khảo.

Khử trùng: Bề mặt xương và các thiết bị dùng để tách chiết phải được khử khuẩn bằng thuốc tẩy chuyên biệt. Sau khi nghiền xương, sử dụng dung dịch đệm phân giải để ủ qua đêm ở nhiệt độ 37°C. Kết tủa DNA bằng muối amoni acetat và ủ hỗn hợp trong đá lạnh. Hỗn hợp sau khi ly tâm sẽ thu và hòa tan DNA trong nước khử ion.

Phương pháp không nghiền xương thành bột bằng công nghệ PCT: Phương pháp này ngăn chặn sự lây nhiễm chéo thường xảy ra do sử dụng chung máy nghiền cho nhiều mẫu xương. Kỹ thuật viên nên cắt xương thành các mảnh nhỏ khoảng 250mg để phù hợp với ống trong công nghệ này.

kỹ thuật tách chiết dna Ảnh: Máy tách chiết DNA

4. Một Số Điều Cần Lưu Ý Khi Thực Hiện Tách Chiết DNA

kỹ thuật tách chiết dna Ảnh: Một số điều cần lưu ý khi thực hiện tách chiết DNA

Để quá trình tách chiết DNA diễn ra chính xác, người thực hiện cần nắm vững kiến thức chuyên môn và lưu ý một số điều quan trọng sau:

SAI SÓT XỬ TRÍ
Lấy không đủ mẫu hoặc lấy sai chất chống đông. Thực hiện theo đúng hướng dẫn quy cách lấy mẫu.
Thao tác pipet chưa chính xác. Thao tác với pipet theo đúng thể tích quy định.
Tín hiệu phản ứng không rõ ràng. Bảo quản hóa chất đúng theo khuyến cáo từ nhà sản xuất.
Thực hiện chính xác và đầy đủ các bước trong quy trình xét nghiệm.

Trên đây là những kiến thức bổ ích liên quan đến kỹ thuật tách chiết DNA trong phòng thí nghiệm mà Thiết bị y tế MEDITOP muốn chia sẻ đến bạn. Nếu bạn đang có nhu cầu đặt mua sản phẩm hỗ trợ tách chiết DNA, hãy liên hệ ngay đến đội ngũ tư vấn của chúng tôi theo thông tin bên dưới để được hỗ trợ tận tình!

Thông tin liên hệ

  • Địa chỉ: 16 BT2 Trần Thủ Độ, Khu Đô Thị Pháp Vân, Hoàng Mai, Hà Nội
  • Hotline: 0963.923.329
  • Website: meditop.com.vn
1